Показатель среднего содержания гемоглобина в эритроците важен для суждения о гипои гиперхромии эритроцитов. Снижение среднего содержания гемоглобина в эритроците (гипохромия) наблюдается вследствие уменьшения объема эритроцитов (микроциты) или понижения содержания гемоглобина в нормальном по объему эритроците. Таким образом, гипохромия не всегда сочетается с микроцитозом, а может быть и при нормои макроцитозе. Это истинный показатель дефицита железа в организме или железорефрактерности, т. е. неусвоения железа эритробластами и нарушения синтеза гема (сидеробластные анемии). Нормохромия обычно имеет место у здоровых людей, но может отмечаться и при некоторых анемиях (острых постгеморрагических, гемолитических, апластических). Гиперхромия зависит исключительно от толщины эритроцитов (макроциты, мегалоциты), а не от степени насыщения их гемоглобином. Это объясняется тем, что концентрация гемоглобина в эритроците имеет предельную величину, не превышающую 0,33 ПГ в 1 МКМ3 объема эритроцита. Гиперхромия с макроцитозом характерна для расстройства обмена витамина В12 или его дефицита (мегалобластные анемии), при некоторых гемолитических и миелотоксических анемиях, нарушениях функции печени.Резистентность эритроцитов Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют их резистентность к различным воздействиям. Наиболее часто в клинике определяют осмотическую резистентность эритроцитов. Различают минимальную и максимальную резистентность. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического (менее 0,85 %) раствора хлорида натрия (в серии постепенно уменьшающихся концентраций), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе 3 ч. Максимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора хлорида натрия, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов.
Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л. И. Идельсона
Принцип
Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах хлорида натрия.
Нормальные величины
У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации хлорида натрия 0,50-0,45 %, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40-0,35 %-ном растворе хлорида натрия.
Клиническое значение
Исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Понижение осмотической резистентности, т. е. появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме, концентрации хлорида натрия (0,70-0,75 %) наблюдается при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, а также иногда при аутоиммунной гемолитической анемии. В ряде случаев понижение осмотической резистентности характерно для талассемии, гемоглобинопатий, возможно при механической желтухе.Пробы на ферментопатию эритроцитов В эритроцитах протекают различные метаболические процессы: гликолиз, пентозофосфатный путь окисления глюкозы, восстановление глутатиона, разрушение перекиси водорода и другие реакции метаболизма. Нарушения этих процессов могут быть связаны с наследственными дефектами синтеза ферментов (энзимопатии). Наиболее распространенной ферментопатией эритроцитов является нарушение синтеза глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) – ключевого фермента пентозофосфатного пути окисления глюкозы. Существует обратное соотношение между активностью Г-6-ФДГ и резистентностью эритроцитов, поэтому дефицит Г-6-ФДГ в клетке может приводить к гемолизу эритроцитов (гемолитический криз) при приеме пациентами ряда препаратов, действующих как оксиданты, – противомалярийных средств (примахин), ацетилсалициловой кислоты, сульфаниламидов, нитрофуранов, 5-НОК, ПАСК, фенацитина и др. Для диагностики дефицита Г-6-ФДГ применяются как качественные методики, так и количественные определения ее активности в эритроцитах.
Тест на образование телец Гейнца – Эрлиха
Нормальные величины
У здоровых людей в эритроцитах наблюдается образование единичных телец красного цвета. Небольшое количество телец Гейнца обнаруживают в клетках новорожденных или больных после спленэктомии.
Клиническое значениеВ эритроцитах с дефицитом Г-6-ФДГ обнаруживается 4–6 телец. Проба неспецифична, поскольку тельца Гейнца появляются в эритроцитах при передозировке сульфаниламидных препаратов, отравлениях анилиновыми красителями, дефиците других ферментов (глутатион-редуктазы, 6-фосфоглюконатдегидрогеназы), у носителей нестабильных гемоглобинов.
Качественная методика Мотульского – Кемпбеля
Нормальные величины
У здоровых людей смесь обесцвечивается через 40–55 мин.
Клиническое значениеЗамедление времени обесцвечивания смеси более 90 мин свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. При гемолитической энзимодефицитной анемии обесцвечивание наступает через 3-24 ч.
Качественная методика по Бернштейну
Нормальные величины
У здоровых людей обесцвечивание смеси происходит через 15–20 мин.
Клиническое значение
Удлинение времени обесцвечивания свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. Неполное обесцвечивание за 30 мин соответствует незначительному уменьшению активности фермента, а отсутствие обесцвечивания к этому времени – резкому ее снижению.Цитохимические исследования эритроцитов
Цитохимические методы исследования основаны на химических реакциях, позволяющих обнаружить в клетках полисахариды, липиды, нуклеиновые кислоты, ферменты и другие соединения. Цитохимические исследования обычно отличаются простотой, не требуют специального оборудования и дают ориентировочное представление о количестве определяемого вещества. При цитохимическом исследовании чаще всего пользуются полуколичественной оценкой результатов, основанной на степени интенсивности специфической окраски.
В зависимости от нее делят все элементы на 4 степени:
1) отрицательные, т. е. неокрашенные (—);
2) слабо положительные (+);
3) положительные (++);
4) резко положительные (+++).Цитохимические исследования эритроцитов проводят с целью выявления различных внутриклеточных включений, наличия разных форм гемоглобина, ферментных нарушений.
Определение негемоглобинового железа
Сидероциты и сидеробласты – это эритроциты и эритробласты (нормобласты), содержащие в цитоплазме негемоглобиновое железо в виде гемосидерина и ферритина.
Нормальные величины
В периферической крови число сидероцитов не превышает 1,1 % и составляет в среднем 0,6 ± 0,04 %; в костном мозге их несколько больше – 0,2–2,1 %; количество сидеробластов (ядерных эритроцитов с железосодержащими гранулами) в костном мозге – 23,7 ± 2,4 %.
Клиническое значениеСнижение сидероцитов и сидеробластов характерно для железо дефицитных анемий. Повышение железосодержащих клеток наблюдается при гемолитических анемиях, после спленэктомий, при миелодиспластическом синдроме (рефрактерной сидеробластной анемии), эритромиелозе.
Методика определения фетального гемоглобина по Бетке
Нормальные величины
У взрослых встречаются единичные окрашенные эритроциты (содержащие гемоглобин F); увеличение числа окрашенных эритроцитов наблюдается у новорожденных и детей до 5-месячного возраста.
Клиническое значение
Увеличение числа эритроцитов с HbF наблюдается у больных гомозиготной талассемией (до 5 %), серповидноклеточной анемией (1-30 %). До 10 % HbF можно обнаружить при пароксизмальной ночной гемоглобинурии, рефрактерной сидеробластной анемии, острых лейкозах, врожденном хроническом миелолейкозе. Снижение HbF наблюдается при гемолитической анемии новорожденных.Активность Г-6-ФДГ (К.Ф.1.1.1.49)
Нормальные величины
В эритроцитах здоровых людей обнаруживают 10–20 гранул формазана.
Клиническое значение
Снижение числа гранул формазана в эритроцитах или их отсутствие указывает на дефицит Г-6-ФДГ. Прием противомалярийных препаратов, фенацетина, больших доз аскорбиновой кислоты, некоторых сульфаниламидов у таких больных может вызвать гемолитическую анемию. Случаи гемолиза возможны при отравлении бобами, диабетическом ацидозе.Скорость оседания эритроцитов (Erytrocyte Sedimentation Rate)
Скоростью оседания эритроцитов (СОЭ) называется скорость разделения несвернувшейся крови на два слоя: нижний, состоящий из осевших эритроцитов, и верхний – из прозрачной плазмы.Исследование СОЭ является одним из самых распространенных методов в лабораторной практике и входит в состав общего клинического анализа крови.
Унифицированная методика Панченкова
Принцип
Свойство крови, смешанной с цитратом натрия, не свертываться при стоянии, а разделяться на два слоя: нижний – эритроциты, верхний – плазма. Расслоение происходит с различной скоростью в зависимости от изменения химических и физических свойств крови. Скорость оседания измеряется в 1 мм за 1 ч.
Нормальные величины
У здоровых мужчин 1-10 мм/ч, у женщин 2-15 мм/ч. У детей на протяжении 1 года жизни СОЭ колеблется между 5,0 + 2,0 мм/ч и 8,0 + 3,0 м/ч, в дальнейшем – между 7,0 + 3,0 м/ч и 9,0 + 3,0 м/ч.
Примечание.При температуре воздуха в помещении, где проводится исследование, ниже 20 °C СОЭ замедляется, выше 20 °C – увеличивается.
Ошибки при постановке СОЭ:
1) нарушение соотношения крови и цитрата;
2) неполное заполнение капилляра;
3) неправильная постановка капилляра;
4) некачественный раствор цитрата натрия;
5) постановка СОЭ позже 2 ч после взятия крови;
6) отклонение температуры;
7) образование сгустка;
8) грязный капилляр;
9) неоткалиброванные капилляры.
Клиническое значение
Одной из основных причин увеличения СОЭ является изменение соотношения между белковыми фракциями крови в сторону увеличения доли крупнодисперсных белков. Играет роль и соотношение между холестерином и лецитином. Уменьшение количества эритроцитов также ведет к увеличению СОЭ. Наиболее частой причиной увеличения СОЭ являются воспалительные заболевания самой различной этиологии (пневмония, сепсис, холецистит), острые и хронические инфекции (туберкулез, инфекционный мононуклеоз, краснуха), инфаркт миокарда, анемии, оперативные вмешательства, беременность, гипопротеинемии. Особенно значительные величины СОЭ отмечены при парапротеинемических гемобластозах (до 60–80 м/ч) и и симптоматических парапротеинемиях, сопутствующих злокачественным новообразованиям (особенно при распаде опухоли), хроническому активному гепатиту, циррозу печени, системным заболеваниям соединительной ткани. Замедление СОЭ наблюдается при истинной полицитемии, гиперпротеинемии, механической желтухе, вирусном гепатите и симптоматических эритроцитозах.Ретикулоциты
Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. При нормальном эритропоэзе ретикулоциты в основном созревают в костном мозге в течение 2–3 дней, 24 ч они находятся в кровеносном русле и превращаются там в зрелые эритроциты. Если ретикулоциты попадают в кровь несозревшими, то время циркуляции увеличивается до 3 суток. Ретикулоциты являются отражением эритропоэтической активности костного мозга, высвобождения из костного мозга большого числа юных клеток.
Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в их цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции, представляющей собой агрегированные рибосомы и митохондрии. Эта субстанция выявляется при суправитальной окраске (без предварительной фиксации). Зернисто-нитчатая субстанция в различных видах ретикулоцитов отличается полиморфизмом. У самых молодых ретикулоцитов субстанция обильная и имеет форму густого клубка. В более зрелых клетках она выявляется в виде сеточки, отдельных нитей, зерен. В мазках, окрашенных по обычным гематологическим методикам, ретикулоциты серовато-розового цвета, полихлороматофильны (окрашиваются разными красителями). Определить количество ретикулоцитов можно при микроскопии специально окрашенных мазков.
Клиническое значение
Число ретикулоцитов в крови отражает регенеративные процессы костного мозга, и оценка его широко используется при различных анемиях.
Повышение количества ретикулоцитов служит критерием активации кроветворения и наблюдается после кровопотери, при гемолитических анемиях, особенно в период криза (количество ретикулоцитов может быть 20–30 %), а также на фоне лечения анемии Аддисона – Бирмера витамином В12 (ретикулоцитарный криз – подъем числа ретикулоцитов на 4-8-й день лечения), в начале ремиссии при гипопластической анемии, при эффективной терапии анемий, при малярии, а также у новорожденных. При таких состояниях, как острый эритроцитомиелоз, метастазы рака в костный мозг, ретикулоцитоз не является показателем хорошей регенераторной способности костного мозга.
Снижение количества ретикулоцитов – показатель снижения интенсивности кроветворения. Наблюдается при апластической анемии, рецидиве В12-фолиеводефицитной анемии, железодефицитной анемии, при приеме цитостатических препаратов, лучевой терапии, заболеваниях почек.Ядросодержащие клетки крови Лейкоциты являются ядросодержащими клетками крови. Они формируют в организме человека мощный кровяной и тканевой барьеры против микробной, вирусной и паразитарной инфекций, поддерживают тканевый гомеостазис и регенерацию тканей. Это высокоспециализированные клетки, обладающие различными функциями.
Нейтрофильные лейкоциты
Нейтрофильные лейкоциты участвуют в уничтожении проникших в организм инфекционных агентов, тесно взаимодействуя с макрофагами, Т– и В-лимфоцитами. Нейтрофилы секретируют вещества, обладающие бактерицидными эффектами, способствуют регенерации тканей, удаляя из них поврежденные клетки, а также секретируя стимулирующие регенерацию вещества. В цитоплазме лейкоцитов содержатся многочисленные мелкие гранулы трех типов.
Гранулы, дающие положительную реакцию на пероксидазу, представлены лизосомами, содержащими многочисленные энзимы: лизоцим, повреждающей клетку бактерий; катионные белки, нарушающие дыхание и рост микроорганизмов; протеазы и кислые гидролазы, позволяющие нейтрофилам легко переваривать фагоцитированные объекты.
Гранулы, не окрашивающиеся на миелопероксидазу, содержат лактоферрин, оказывающий бактериостатическое действие, транскобаламины I и III – переносчики витамина В12 в крови, лизоцим.В гранулах третьего типа содержатся кислые глюкозаминогликаны, участвующие в процессах размножения, роста и регенерации тканей.
Базофильные лейкоциты
Базофильные гранулоциты крови и тканей (к последним относят и тучные клетки) выполняют множество функций: поддерживают кровоток в мелких сосудах, способствуют росту новых капилляров и трофике тканей, обеспечивают миграцию других лейкоцитов в ткани. Они способны к фагоцитозу, миграции из кровяного русла в ткани и передвижению в них. Базофильные лейкоциты участвуют в формировании аллергических реакций немедленного типа. Цитоплазма зрелых базофилов содержит гранулы неравных размеров. Базофилы могут синтезировать и накапливать в гранулах биологически активные вещества, очищая от них ткани, а затем секретировать их. Постоянно в клетке присутствуют:
1) кислые глюкозаминогликаны и гепарин – основной антикоагуляционный фактор;
2) гистамин – антагонист гепарина, укорачивающий время кровотечения, активатор внутрисосудистого тромбообразования. Гистамин стимулирует фагоцитоз, оказывает противовоспалительное действие на ткань.Базофилы оказывают свои эффекты благодаря дегрануляции, т. е. выбросу содержимого гранул во внеклеточную среду.
Эозинофильные лейкоциты
Функции эозинофилов направлены на защиту организма от паразитарной гельминтной инфекции. Эозинофилы уменьшают концентрацию биологически активных соединений, возникающих при развитии аллергических реакций. Эозинофилы являются антагонистами тучных клеток и базофилов благодаря секреции соединений, предупреждающих длительное действие биологически активных веществ, выделяемых этими клетками. Эозинофилы обладают фагоцитарной и бактерицидной активностью. В цитоплазме присутствуют 2 типа гранул: