ДНК-диагностика (ПЦР) генитальных инфекций
К ДНК-диагностике относят несколько методов, но самый распространенный – полимеразная цепная реакция (ПЦР). Это обнаружение в исследуемом материале ДНК возбудителя инфекции. ДНК – это молекула, в которой заключена вся информация о клетке. В клетках организмов одного вида (например, микоплазмы генитальной) определенные участки ДНК одинаковые. Поэтому, зная строение этих участков у основных возбудителей, можно создать зеркальные копии, которые будут находить ДНК возбудителя и связываться с ними. Нахождение даже одного такого участка достаточно для того, чтобы ПЦР была положительной. Это говорит о крайне высокой чувствительности метода.
Метод хорош для диагностики инфекций, не обнаруживаемых в мазках: хламидиоза, уреа– и микоплазмоза, генитального герпеса. Однако для определения эффективности лечения тех же заболеваний метод неприемлем, т. к. и после распада клеток в организме могут остаться кусочки ДНК. Признаком неизлеченности могут служить только жизнеспособные размножающиеся микроорганизмы, а их можно обнаружить только с помощью посева.
Также нежелательно использовать метод ПЦР для диагностики гарднереллеза, т. к. эти бактерии содержатся во влагалище и в условиях нормы. Их не должно быть в мазке, и в данном случае бактериоскопия – достаточный метод для диагностики гарднерелллеза и контроля лечения. А ДНК этих бактерий может и должна находиться в материале, это не есть критерий болезни.
Материал для ПЦР берут из канала шейки матки, иногда – из наружного отверстия мочеиспускательного канала специальной стерильной одноразовой щеточкой. Перед взятием материала обязательно удаляют слизь и выделения ватным тампоном, невыполнение этого правила часто ведет к ложным результатам. Большинство исследуемых микроорганизмов – внутриклеточные паразиты, поэтому для их обнаружения необходим соскоб клеток, а не выделения, которые мешают добраться до эпителия. Затем материал со щеточки помещают в контейнер с физраствором, который до выполнения анализа должен храниться в холодильнике. Главное условие при этом – соблюдение стерильности.
Причины ложных результатов ПЦР:
1. Самая частая причина – несоблюдение правил забора материала – неудаление слизи из канала шейки матки. Вы не можете ее контролировать. Единственное, что вы можете, – выбрать врача-гинеколога, которому доверяете.
2. Негодность реагентов. Эту причину вы тоже не можете контролировать, она лежит на совести лабораторий.
3. Опять же несоблюдение правил взятия материала – попадание в материал ДНК бактерий из воздуха, с рук, покровного стекла (почему-то часто материал на ПЦР сдается в виде обычного мазка на стекле. Это неправильно, ведь стекло не может быть стерильным). Стерильность может быть нарушена и в лаборатории, если посторонние люди будут часто ходить вокруг рабочего образца и «натрясут» разные ДНК со своей одежды. Это вы тоже никак не проверите. Основная же ошибка в лаборатории совершается при нарушении «режима» лаборатории – несвоевременной замене праймера и пр. технических тонкостей.
Поэтому, несмотря на то что ПЦР – самый чувствительный и специфичный метод диагностики, у него есть свои недостатки. Результаты должны быть проанализированы лечащим врачом с учетом возможности всего вышесказанного. Диагноз ставится на основании жалоб и симптомов. Любой диагностический метод – вспомогательный, на него нельзя полагаться на все 100 %.
Часть VIII Исследование мокроты
Мокрота выделяется во время кашля из дыхательных путей. Когда больной собирает материал для анализа, он должен помнить об этом и не собирать вместо мокроты слюну или слизь из носоглотки.
Состав, количество, цвет, запах и консистенция мокроты зависят от имеющегося у пациента заболевания. Необходимо помнить, что зловонный или гнилостный запах мокроты свидетельствует о серьезном поражении бронхолегочной системы и тяжелом состоянии больного.
Мокрота имеет важное значение для диагностики заболевания и поэтому является объектом лабораторного исследования.
В сутки пациент может выделять до 1,5 л мокроты.
Необходимо помнить, что мокрота, как биологическая жидкость, может представлять опасность для окружающих людей. Так, при некоторых формах туберкулеза в мокроте могут содержаться возбудители этого заболевания – микобактерии туберкулеза. В этих случаях мокрота должна определенным образом собираться и обрабатываться для предупреждения распространения заболевания. В целях сбора мокроты используют плевательницы – стеклянные сосуды с крышкой.
Собирать ее лучше утром, перед этим необходимо прополоскать рот слабым раствором антисептика, затем кипяченой водой. При осмотре отмечают суточное количество, характер, цвет и запах мокроты, ее консистенцию, а также расслоение при стоянии в стеклянной посуде. Мокрота может содержать клеточные элементы крови, опухолевые клетки, простейшие микроорганизмы, личинки аскарид, растительные паразиты (грибы), различные бактерии и др. Микроскопическое изучение клеток позволяет установить активность процесса при хронических заболеваниях бронхов и легких, диагностировать рак легкого.
Бактериологическое исследование необходимо для уточнения диагноза, выбора метода лечения, для определения чувствительности микрофлоры к различным лекарственным средствам, имеет большое значение для выявления микобактерии туберкулеза. Появление кашля с мокротой требует обязательного обращения к врачу.
Часть IX Исследование спинномозговой жидкости
Цереброспинальная жидкость – жидкая биологическая среда организма, циркулирующая в желудочках головного мозга, субарахноидальном пространстве головного и спинного мозга. Выполняет в центральной нервной системе защитно-питательные функции. Она предохраняет головной и спинной мозг от механических воздействий, обеспечивает поддержание постоянного внутричерепного давления и водно-электролитного баланса.
Цереброспинальную жидкость получают при спинномозговой пункции. Она прозрачна, бесцветна, имеет постоянный удельный вес и слабощелочную реакцию. Химический состав ее сходен с сывороткой крови. Содержит белки, углеводы, мочевину, фосфор, микроэлементы и др. При микроскопическом исследовании цереброспинальной жидкости определяют количество и характер содержащихся в ней клеток. Специальные бактериологические исследования проводят при подозрении на воспаление мозговых оболочек. Основная цель – выделение возбудителя и определение его чувствительности к антибиотикам.
Цереброспинальная жидкость изменяется при различной патологии. Снижение прозрачности вызывается примесью крови, увеличением количества клеток и повышением количества белка, что наблюдается при туберкулезном менингите, субарахноидальных кровоизлияниях, тяжелых черепно-мозговых травмах и опухолях.
При хронических воспалительных процессах в центральной нервной системе белок появляется только в период обострения. Снижение содержания глюкозы в цереброспинальной жидкости является признаком менингита, а ее повышение – симптомом острого энцефалита. Большое диагностическое значение имеет определение электролитного состава цереброспинальной жидкости и определение клеток опухоли.
Исследование спинномозговой жидкости, то есть люмбальная пункция, или, как ее еще называют медики, поясничный прокол, имеет огромное значение для диагностики многих заболеваний. Для невропатолога оно не менее важно, чем, например, оценка результатов анализа крови для терапевта. Ведь спинномозговая жидкость, циркулирующая между паутинной и мягкой мозговыми оболочками и в желудочках мозга, выполняет роль барьера между кровью и мозгом. Она препятствует проникновению вредных веществ в мозговую ткань, участвует в ее питании и выводит в венозную систему отработанные продукты обмена. Находясь в такой тесной связи с мозгом, спинномозговая жидкость, как зеркало, отражает и происходящие в нем изменения. При некоторых заболеваниях в ней могут появляться патологические клетки, продукты нарушенного обмена, кровь и т. д. Обнаружение их и позволяет точно поставить диагноз.
Таблица 23
Основные характеристики цереброспинальной жидкости (норма)
Извлечение спинномозговой жидкости с помощью люмбальной пункции служит и лечебной мерой при многих заболеваниях мозга и его оболочек, сопровождающихся повышением внутричерепного давления. После этой процедуры давление снижается, и больному становится легче. И наконец, врачи используют поясничный прокол для введения лекарственных веществ непосредственно в межоболочечное пространство мозга и его желудочки – в этом случае медикаменты действуют гораздо эффективнее.
Таблица 23
Основные характеристики цереброспинальной жидкости (норма)
Извлечение спинномозговой жидкости с помощью люмбальной пункции служит и лечебной мерой при многих заболеваниях мозга и его оболочек, сопровождающихся повышением внутричерепного давления. После этой процедуры давление снижается, и больному становится легче. И наконец, врачи используют поясничный прокол для введения лекарственных веществ непосредственно в межоболочечное пространство мозга и его желудочки – в этом случае медикаменты действуют гораздо эффективнее.
Часть Х Исследование выделений из тканей при воспалении (экссудатов и транссудатов)
Экссудат
Экссудат (exsudatum; лат. exsudare – выходить наружу, выделяться) – жидкость, богатая белком и содержащая форменные элементы крови; образуется при воспалении. Процесс перемещения экссудата в окружающие ткани и полости организма называется экссудацией, или выпотеванием. Последняя возникает вслед за повреждением клеток и тканей в ответ на выделение медиаторов.
В зависимости от количественного содержания белка и вида эмигрировавших клеток различают серозный, гнойный, геморрагический, фибринозный экссудат. Встречаются также смешанные формы экссудата: серозно-фибринозный, серозно-геморрагический. Серозный экссудат состоит преимущественно из плазмы и небольшого числа форменных элементов крови. Гнойный экссудат содержит распавшиеся полиморфно-ядерные лейкоциты, клетки пораженной ткани и микроорганизмы. Для геморрагического экссудата характерно наличие значительной примеси эритроцитов, а для фибринозного – большое содержание фибрина. Экссудат может рассасываться или подвергаться организации.
Транссудат
Транссудат (лат. trans – через, сквозь + sudare – сочиться, просачиваться) – невоспалительный выпот, отечная жидкость, скапливающаяся в полостях тела и тканевых щелях. Транссудат обычно бесцветен или бледно-желтого цвета, прозрачный, реже мутноват из-за примеси единичных клеток спущенного эпителия, лимфоцитов, жира. Содержание белков в транссудате обычно не превышает 3 %; ими являются сывороточные альбумины и глобулины. В отличие от экссудата в транссудате отсутствуют ферменты, свойственные плазме. Относительная плотность транссудата 1,006–1,012, а экссудата – 1,018–1,020. Иногда качественные различия между транссудатом и экссудатом исчезают: транссудат становится мутноватым, количество белка в нем возрастает до 4–5 %. В таких случаях важное значение для дифференциации жидкостей имеет изучение всего комплекса клинических, анатомических и бактериологических изменений (наличие у больного боли, повышенной температуры тела, воспалительной гиперемии, кровоизлияний, обнаружение в жидкости микроорганизмов). Для отличия транссудата от экссудата применяют пробу Ривальты, основанную на разном содержании в них белка.
Таблица 24
Характеристика перитонеальной жидкости при асците различного происхождения
Образование транссудата чаще всего обусловлено сердечной недостаточностью, портальной гипертензией, застоем лимфы, тромбозом вен, почечной недостаточностью. Механизм возникновения транссудата сложен и определяется рядом факторов: увеличенным гидростатическим давлением крови и сниженным коллоидно-осмотическим давлением ее плазмы, повышенной проницаемостью капиллярной стенки, задержкой в тканях электролитов, преимущественно натрия и воды. Скопление транссудата в полости перикарда называют гидроперикардом, в брюшной полости – асцитом, в плевральной – гидротораксом, в полости оболочек яичка – гидроцеле, в подкожной клетчатке – анасаркой. Транссудат легко инфицируется, превращаясь в экссудат. Так, инфицирование асцита приводит к возникновению перитонита (асцит-перитонит). При длительном скоплении в тканях отечной жидкости развиваются дистрофия и атрофия паренхиматозных клеток, склероз. При благоприятном течении процесса транссудат может рассосаться.
Асцит
Асцит – накопление жидкости в брюшной полости. Небольшое ее количество может не давать симптомов, но увеличение жидкости ведет к растяжению брюшной полости и появлению дискомфорта, анорексии, тошноты, изжоги, болей в боку, респираторных расстройств.
Ценную информацию дает диагностический парацентез (50–100 мл); используют иглу 22 размера; выполняют пункцию по белой линии на 2 см ниже пупка или со смещением кожи в левом или правом нижнем квадранте живота. Обычное обследование включает осмотр, определение содержания в жидкости общего белка, альбумина, глюкозы, число клеточных элементов, цитологическое исследование, посев на культуру; иногда исследуют амилазу, ЛДГ, триглицериды, проводят посев на микобактерию туберкулеза. Изредка требуется лапароскопия или даже диагностическая лапаротомия. Асцит при ЗСН (констриктивный перикардит) может потребовать диагностической катетеризации правого сердца.
Часть XI Исследование костного мозга
Красный костный мозг у взрослого человека находится в эпифизах (конечных участках) трубчатых костей и губчатом веществе плоских костей. Несмотря на разобщенное положение, функционально костный мозг связан в единый орган благодаря миграции клеток и регуляторным механизмам.
Красный костный мозг является органом, осуществляющим универсальное кроветворение. Таким образом, его можно также считать одним из органов иммунологической защиты.
Основное вещество красного костного мозга представлено костными балками и так называемой ретикулярной тканью. В ретикулярной ткани имеется густая сеть кровеносных сосудов. В основном это синусоидные капилляры, чьи стенки имеют множество пор, легко пропускающих в кровоток новые клетки крови.
В петлях ретикулярной ткани залегают островки молодых клеток крови на разных стадиях дифференцировки – от стволовой до зрелых форменных элементов. По мере созревания зрелые форменные элементы крови проникают в синусоидные капилляры через поры в их стенках.
В норме в кровь поступают только зрелые клетки.
Наряду с красным в нашем организме присутствует и желтый костный мозг, который находится в диафизах (средних участках) трубчатых костей. В норме кроветворные элементы в нем отсутствуют, но при кровопотерях они заселяются в ретикулярную ткань желтого костного мозга, и он превращается в кроветворную ткань. Значит, желтый и красный костный мозг можно считать двумя функциональными состояниями одного кроветворного органа.
Самое полное представление о состоянии кроветворной системы можно получить, исследовав пунктат костного мозга (из грудины или остистого отростка позвонка) и трепанобиопсию (из гребешка подвздошной кости).
Микроскопическое исследование окрашенных мазков костного мозга дает представление о том, насколько активно работает каждый из ростков кроветворения и выявить связанные с ними патологии.
Часть XII Диагностика раковых заболеваний
На протяжении последних десятилетий использование биохимических (по зарубежной терминологии – клинико-химических) лабораторных тестов в онкологической практике приобретало все большее значение, и этот рост продолжается в настоящее время. Новые технологические достижения на каждом этапе приводили к замене старых лабораторных методик на более совершенные, более точные и чувствительные, а также к введению дополнительных тестов, позволяющих диагностировать физическое присутствие опухоли, системные проявления злокачественного новообразования, сопутствующие опухолям синдромы, а также определять маркеры опухолей.
По мнению большинства онкологов, наиболее приемлемым методом для ранней диагностики первичной опухоли и ее метастазов, а также мониторинга лучевой– и химиотерапии является определение онкомаркеров (веществ белковой природы, присутствующих в биологических жидкостях организма).
Как известно, онкомаркер позволяет отличить злокачественную опухоль от доброкачественной на основе количественных отличий в содержании соответствующего антигена – опухолевого маркера в сыворотке крови вне зависимости от локализации опухолевого очага. Опухолевая клетка способна выделять в кровь 1 пикограмм (10–12 г) онкомаркера, что в пересчете на концентрацию составляет около 200 нг/мл. Методы тестирования зачастую превосходят по своей чувствительности эту концентрацию. Таким образом, повышенный уровень маркеров обнаруживается уже при малых размерах опухоли.
Многолетний опыт использования этих чувствительных и высокоспецифичных тестов в медицинской практике показал, что внедрение онкомаркеров в диагностическую практику значительно повышает эффективность работы онколога.