В эякуляте всегда присутствуют все категории подвижности. Обычно больше всего неподвижных сперматозоидов категории D (от 40 до 60 %), как правило, это умершие или умирающие «от старости» сперматозоиды. Поэтому чем меньше воздержание перед семяизвержением, тем меньше неподвижных сперматозоидов в эякуляте. Также обычно много быстрых прямолинейных спермиев категории А (40–60 %), это здоровые, «молодые» сперматозоиды, недавно сформировавшиеся в яичках. Непрогрессивно-подвижных сперматозоидов категории В обычно 10–15 %, это, как правило, сперматозоиды с нарушениями строения шейки и жгутика либо «стареющие». Также обычно мало сперматозоидов медленных с прямым движением категории С (5–15 %).
В нормальной фертильной сперме прогрессивно-подвижных сперматозоидов (A+B) должно быть не менее половины либо быстрых прогрессивно-подвижных (A) не менее четверти. На подвижность сперматозоидов влияет много факторов. Важным фактором является температура: при температуре тела (около 37 °C) скорость движения максимальна, при комнатной температуре она снижается, а при температуре менее 10 °C сперматозоиды почти не движутся. Нередко бывает, что сперматозоиды, отнесенные к категории B при комнатной температуре, могут быть отнесены к категории A, если взглянуть на них при температуре 37 °C. Поэтому в ряде лабораторий микроскоп для спермограммы оснащен специальным подогреваемым «термостолом», отрегулированным на 37 °C.
Существуют методы, позволяющие узнать, какое количество сперматозоидов среди неподвижных являются живыми. Для этого сперму подкрашивают эозином. Это вещество красного цвета не может проникнуть сквозь оболочку живого сперматозоида, но оболочка погибшего спермия быстро разрушается, и он окрашивается красным. Данный метод имеет смысл применять при акинозооспермии – полной неподвижности сперматозоидов, чтобы выяснить, связана ли эта неподвижность с гибелью или нарушениями жгутикового аппарата. В соответствии с этим можно выработать план лечения бесплодия.
Доля аномальных сперматозоидов
Человек, впервые увидевший сперму под микроскопом, обычно бывает ошеломлен множеством «уродливых», «кривых» сперматозоидов. Здесь и безголовые, и двухвостые, и с кривой головкой. Но пугаться не надо. Специальные исследования показали, что мужчины, чья сперма содержит до 85 % патологичных спермиев, могут иметь здоровых детей. Это, конечно, при прочих нормальных параметрах.
Доля аномальных сперматозоидов определяется двумя методами. Первый – изучение морфологии сперматозоидов в нативном эякуляте, то есть сперму, как она есть (нативная), рассматривают под микроскопом. При этом пытаются сосчитать, сколько сперматозоидов из 100 являются аномальными. Метод этот очень неточен, поскольку, во-первых, не все патологии можно увидеть без специальной обработки спермы, а во-вторых, сперматозоиды движутся и с трудом поддаются детальному разглядыванию. Поэтому при превышении аномальными сперматозоидами барьера 50 %, проводят изучение морфологии сперматозоидов на окрашенном мазке. Для этого каплю спермы размазывают по предметному стеклышку, высушивают в потоке воздуха, обрабатывают спиртом, снова высушивают, погружают в несколько различных красителей, отмывают от лишней краски и заключают в специальный бальзам для микроскопирования. После такой обработки сперматозоиды обездвиживаются, приклеиваются к стеклу и окрашиваются. Их легко можно рассмотреть и посчитать, при этом могут быть обнаружены нарушения, невидимые при первом методе (например, отсутствие акросомы).
Для оценки качества спермы считают не только долю аномальных сперматозоидов (она должна быть менее 85 % в окрашенном мазке), но также среднее количество патологий на один сперматозоид (так называемый индекс спермальных нарушений, SDI) и среднее количество патологий на один аномальный сперматозоид (так называемый индекс тератозооспермии, TZI). При превышении TZI значения 1,6 сперма считается аномальной, а при превышении SDI значения 1,6 могут возникнуть проблемы даже при искусственном оплодотворении.
Спермагглютинация
Спермагглютинация, или склеивание сперматозоидов, – сигнал грозных иммунных нарушений, которому, к сожалению, не всегда уделяют должное внимание. Часто неправильно думают, что агглютинация не позволяет сперматозоидам свободно двигаться и достичь яйцеклетки. Это неверно. Само по себе склеивание затрагивает обычно небольшую часть сперматозоидов и не препятствует движению большинства, но наличие агглютинации может свидетельствовать о присутствии в эякуляте антиспермальных антител, которые и могут быть причиной бесплодия. Истинную спермагглютинацию не всегда легко распознать, иногда требуются специальные методы для отличия ее от спермагрегации. Агрегация сперматозоидов – это склеивание, вызванное не иммунными причинами, а слизью, содержащейся в семенной жидкости. Спермагрегация на фертильность спермы не влияет.
Антиспермальные антитела (АСА, или АСАТ) – это антитела организма против сперматозоидов. Соединяясь со жгутиком, АСА подавляют движение сперматозоида. Прилипая к головке, препятствуют оплодотворению. АСА могут образовываться как в организме мужчины, так и в организме женщины, вызывая бесплодие. Для диагностики АСА в сперме используют различные методы, наиболее распространенным среди которых является MAR-тест (Mixed Immunoglobuline Reaction – «реакция иммуноглобулинов при смешивании»).
Кроме сперматозоидов в эякуляте присутствуют так называемые округлые клетки. Под этим собирательным названием подразумевают лейкоциты и незрелые клетки сперматогенеза, то есть клетки, из которых в яичках образуются зрелые сперматозоиды. В норме концентрация лейкоцитов не должна превышать 1 млн/мл. Принято считать, что большая концентрация этих иммунных клеток может свидетельствовать о воспалительных процессах в придаточных половых железах (простате или семенных везикулах). Без специального окрашивания отличить лейкоциты от незрелых клеток сперматогенеза трудно, поэтому ВОЗ рекомендует прибегать к окрашиванию, если общая концентрация всех округлых клеток превышает 5 млн/мл.
Таблица 22
Нормальные характеристики спермограммы
Какие термины используются для описания нарушений спермы?
Для описания нарушений спермы существуют различные термины. В настоящее время большинство специалистов пользуется следующей номенклатурой:
Нормоспермия – все характеристики эякулята в норме, нормальная сперма.
Нормозооспермия – все характеристики, связанные с фертильностью спермы, в норме, но при этом допустимы отклонения, не влияющие на бесплодие (повышенное содержание округлых клеток, аномальный pH, аномальная вязкость или неразжижение эякулята).
Олигоспермия – недостаточный объем эякулята (менее 2 мл).
Олигозооспермия – недостаточное количество сперматозоидов (концентрация менее 20 млн/мл).
Астенозооспермия – недостаточная подвижность сперматозоидов (А<25 % или A+B<50 %).
Акинозооспермия – полная неподвижность сперматозоидов.
Тератозооспермия – повышено содержание аномальных сперматозоидов (более 50 % при исследовании нативного эякулята или более 85 % при исследовании окрашенного мазка спермы).
Некрозооспермия – отсутствие живых сперматозоидов.
Лейкоцитоспермия – повышено содержание лейкоцитов (более 1 млн/мл).
Гемоспермия – присутствие эритроцитов в эякуляте.
Азооспермия – отсутствие сперматозоидов в эякуляте.
Когда пациент знакомится с результатами спермограммы, он должен знать следующее. Все до единой характеристики спермы сильно меняются с течением времени. Если объем спермы при анализе составил 3 мл, то при следующей эякуляции он может иметь совсем другие значения, также иные значения он будет иметь спустя месяц, тем более спустя полгода. Тот же принцип касается остальных параметров. В руководстве ВОЗ приводятся результаты интересного исследования, включавшие график концентрации сперматозоидов мужчины, которому в течение двух лет дважды в неделю делали спермограмму. Значения концентрации колебались от 120 млн/мл (отличная сперма) до 15 млн/мл (олигозооспермия). Именно поэтому в репродуктологии общепризнано, что для анализа необходимо исследовать сперму дважды с интервалом не менее двух недель, а в случае существенных различий в параметрах – трижды.
Кроме того, пациент должен представлять, что даже самые точные данные имеют свою область ошибки. Например, использование камеры Горяева (самого точного прибора для расчета количества клеток) допускает ошибку 5 %. Поэтому, если в результатах стоит значение концентрации 20,3 млн/мл, это значит, что концентрация находится в пределах от 19 до 21 млн/мл. Если же указана концентрация 136, 5 млн/мл, то надо воспринимать ее как интервал 129,7–143,3 млн/мл.
И последнее. Все нормы – относительны и условны. Нельзя сказать, что сперма объемом 2,1 мл «еще нормальная», а 1,9 мл – «уже плохая». Эти значения приблизительно равны в смысле оплодотворяющей способности. Некоторые образцы с «отклонениями» могут иметь гораздо больше шансов для исхода зачатия, чем иная формально «нормальная» сперма. Например, эякулят объемом 1,6 мл, с концентрацией сперматозоидов 180 млн/мл, хорошей подвижностью 70 % и невысоким содержанием аномальных форм 22 %, формально может быть отнесен к патологическому состоянию олигоспермии. В то же время формально «нормальной» будет сперма с объемом 2 мл, концентрацией 26 млн/мл, подвижностью 27 % и половиной аномальных сперматозоидов, хотя шансы на зачатие с таким эякулятом невелики. Поэтому грамотно оценить состояние эякулята может только специалист-репродуктолог, учитывая все параметры спермограммы.
Глава 27 Исследование выделений предстательной железы
Предстательная железа окружает верхнюю часть уретры, или мочеиспускательного канала. Чтобы понять, как выглядит простата, представьте себе маленькое яблоко с отверстием, вырезанным на месте сердцевины. Через это отверстие и проходит уретра.
Предстательная железа участвует в выработке и развитии сперматозоидов, или мужских половых клеток, обеспечивает их транспорт по семявыводящим путям и дальнейшую подвижность и активность в ходе оплодотворения.
Уролог получает секрет, или сок предстательной железы, массируя ее через задний проход. В норме это мутная белесоватая жидкость. Микроскопическое исследование выявляет лецитиновые зерна, сперматозоиды, отдельные амилоидные тельца, единичные лейкоциты и эритроциты.
При простатитах и воспалениях семенных пузырьков в соке простаты наблюдается рост числа лейкоцитов и уменьшение количества лецитиновых зерен. В этом случае следует подвергнуть исследованию не только секрет простаты, но и мочу.
Глава 28 Исследование выделений из влагалища и шейки матки
Одной из частых причин женского бесплодия являются воспалительные заболевания половых органов, в частности – влагалища.
Влагалище представляет собой уникальную микроэкосистему, по состоянию которой врач может диагностировать ряд гинекологических патологий, а также судить о способности женщины к зачатию и вынашиванию детей.
Важнейшим фактором стабильности этой системы является слабокислая среда (рН 3,8–4,2), содержащая ионы калия, натрия и магния, хлориды, белок, иммуноглобулины, ферменты, микроэлементы и ряд других веществ.
Определение степени чистоты влагалища
В норме у здоровой женщины в сутки должно выделяться около 0,76–4,50 мл влагалищной жидкости. Из выделений влагалища, а также из соскоба с поверхности влагалища и шейки матки готовят окрашенные мазки, которые затем исследуют под микроскопом. По принятой в РФ системе врач различает IV степени так называемой чистоты влагалища.
I степень характерна для здоровых половых органов. В мазке можно обнаружить влагалищную палочку Деферлейна (именно эти бактерии и составляют нормальную микрофлору) и единичные клетки плоского эпителия.
II степень говорит об отсутствии каких-либо общих и местных заболеваний. В мазке обнаруживается не только влагалищная палочка, но и другая микрофлора (чаще всего молочнокислая и кишечная палочки), единичные лейкоциты, повышенное количество эпителиальных клеток.
III степень четко говорит о патологии. Влагалищных палочек мало, зато много лейкоцитов и представителей микрофлоры (кокки, грибы и т. д.). Кислая реакция меняется на слабощелочную.
IV степень характеризует болезнь непосредственно влагалищной стенки. В мазке совсем нет влагалищных палочек, обилие патогенных микробов. Повышается количество лейкоцитов и понижается количество эпителиальных клеток. Могут быть обнаружены такие возбудители, как гонококки и трихомонады.
При патологии выделения из влагалища становятся обильными и густыми – их называют белями. Воспаление влагалища (вагинит, кольпит) может быть результатом заражения трихомонадами, гонококком, грибком (грибковый кольпит) или септической инфекции. Тогда выделения становятся гнойными или слизистыми, а их микроскопическое и бактериологическое исследование позволяет определить причину патологии и назначить лечение.
В некоторых случаях в соскобе со стенки влагалища или шейки матки врач может обнаружить форменные элементы крови или атипичные клетки, оставшиеся после распада злокачественной опухоли влагалища.
Мазок по Папаниколау (цитология)
Мазок по Папаниколау, или Пап-тест, нужен для того, чтобы выявить отклонения со стороны клеток шейки матки. В нашей стране его еще называют мазком на атипичные клетки, или на цитологию. Все это «имена» одного анализа.
Мазок по Папаниколау не следует делать во время менструации, а также при наличии воспаления, так как полученный результат может оказаться ложным. В течение суток, как и при заборе мазка на флору, следует избегать интимной близости, не использовать свечи или тампоны.
В цитологическом мазке оцениваются размеры, форма, количество и характер расположения клеток. У молодых девушек по этому анализу можно оценить правильность выработки эстрогенов. Мазок считается нормальным или отрицательным, когда все клетки имеют нормальные размеры и форму, отсутствуют атипичные клетки. Атипичные клетки – это «неправильные» клетки. У них неправильные форма, размеры и располагаются они часто не так, как надо.
В первой половине цикла клетки располагаются по отдельности, во второй половине клетки как бы «кучкуются». Поэтому такой мазок еще иногда называют «грязным». Для описания аномального мазка врачи-цитологи используют специальные термины: дисплазия 1-й, 2-й и 3-й степени, атипия. При дисплазии 1-й степени необходимо повторить исследование через 3–6 месяцев. Такой результат может быть при непролеченном хламидиозе, гонорее или трихомониазе. Поэтому необходимо повторить процедуру после курса лечения.
В случае, когда в предыдущем мазке находили дисплазию или женщина или ее партнер страдали герпесом или остроконечными кондиломами, надо сделать дополнительное обследование – кольпоскопию.
Если выявлена дисплазия 2-й или 3-й степени, то в этом случае не обойтись без биопсии. При этом с измененного участка берется небольшой кусочек ткани. При выявлении атипичных клеток необходима консультация онколога.
Аномальный мазок не всегда означает, что у женщины есть онкологическое заболевание шейки матки. При воспалении клетки тоже могут выглядеть аномальными. Но после лечения мазок обычно становится нормальным.
Бактериологическое исследование влагалищной флоры
Бактериологическое исследование (посев, культуральный метод) – означает выращивание бактерий на питательных средах. Этот метод гораздо более чувствительный, чем микроскопия, потому что позволяет обнаружить возбудителя при его небольшой концентрации, когда он не попадает в мазок. Анализ берут после вставления зеркала, под контролем глаза из канала шейки матки специальным стерильным тампоном. При вас вскрывают одноразовую пробирку с тампоном (она заклеена заводским способом) и, ничего не касаясь, вводят тампон в канал шейки матки. Одно движение и, ничего не касаясь, тампон возвращают в пробирку и наглухо ее закрывают. Самое главное при взятии материала для посева – стерильность, чтобы попали бактерии именно из исследуемой области, а не из воздуха, кожи и т. д.
В лаборатории тампоном касаются питательной среды (желатин или агар-агар), на которой и растут бактерии. Обычный посев производится при доступе воздуха, т. е. анаэробные (не использующие кислород) бактерии вырасти не могут. Их посев тоже возможен, но это специальное исследование, которое делается не во всех лабораториях. Для выращивания вирусов (герпес) и хламидий также требуются специальные условия и среды, это отдельные анализы.
Культуральный метод – это так называемый «золотой стандарт» диагностики многих инфекций и основной метод контроля эффективности лечения. Он гораздо чувствительнее и специфичнее (см. ниже) обычного мазка и имеет преимущества перед ДНК-диагностикой (ПЦР). Дело в том, что важно не обнаружение микроба, а доказательство того, что именно он является возбудителем инфекции, а это не одно и то же. В организме часто присутствуют микроорганизмы, или «условные патогены», которые в норме не вызывают болезни, а при снижении иммунитета, развитии дисбактериоза – могут вызывать. Их обнаружение не доказывает их роли в развитии инфекции. А вот их рост на питательных средах говорит о том, что они, во-первых, жизнеспособны (могут вырасти и вызвать болезнь), во-вторых, многочисленны (отдельные микроорганизмы подавляются теми, которых больше, и тогда на среде вырастает не возбудитель инфекции, а нормальная флора). Еще одно преимущество бактериологического исследования заключается в том, что оно позволяет посчитать количество возбудителя (по числу выросших колоний), а также определить чувствительность к антибиотикам (в питательную среду добавляют разные антибиотики и смотрят, от какого препарата бактерии гибнут). Единственным недостатком метода является длительность его исполнения (бактерии растут несколько дней) и высокие требования к лаборатории.