Руководство к практическим занятиям по биохимии. Учебное пособие для студентов специальностей «Ветеринария» и «Ветеринарно-санитарная экспертиза» - Татьяна Александровна Лобаева 2 стр.

2 неделя. Лабораторная работа «Цветные реакции на белки и аминокислоты». Лабораторные работы «Диализ белков», «Хроматография аминокислот». Семинар «Простые и сложные белки». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

3 неделя. Семинар «Нуклеиновые кислоты. Структура ДНК и РНК и их биологическая роль», «Витамины». Лабораторная работа «Количественное определение витамина С в картофеле». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

4 неделя. Семинар по теме «Ферменты, коферменты, витамины». Лабораторная работа «Действия амилазы на крахмал». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

5 неделя. Коллоквиум 1 «Аминокислоты, белки, нуклеиновые кислоты. Ферменты и витамины». Контрольная работа.

6 неделя. Семинар «Гормоны». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

7 неделя. Семинар «Обмен углеводов. Регуляция обмена углеводов». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос). Лабораторная работа «Определение продукта ферментативного расщепления крахмала».

8 неделя. Семинар «Обмен углеводов. Пентозофосфатный путь». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

9 неделя Семинар «Биологическое окисление». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

10 неделя. Коллоквиум по Модулю 2 «Гормоны. Обмен углеводов». Контрольная работа.

11 неделя. Семинар «Обмен липидов. Регуляция липидного обмена». Лабораторная работа «Кинетика действия свиной липазы». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

12 неделя. Семинар «Обмен липидов: распад и синтез высших жирных кислот. Расчет энергетического эффекта распада высших жирных кислот». Лабораторная работа «Определение некоторых веществ в образцах мочи человека». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

13 неделя. Семинар «Обмен белков и аминокислот: переваривание, всасывание, пути превращения». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос). Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

14 неделя. Семинар «Обмен белков и аминокислот: токсичность и нейтрализация аммиака в организме». Лабораторная работа «Количественное определение белка биуретовым методом. Построение калибровочных кривых». Проверка домашней подготовки к занятию (устный опрос).

15 неделя. Семинар по теме: «Обмен белков». Контрольная работа.

16 неделя. Коллоквиум по Модулю 3 «Обмен липидов. Обмен простых белков».

17 неделя. Итоговое занятие.

Правила пользования приборами для биохимических исследований

В биохимических исследованиях фотометр используется для определения концентрации вещества в растворе по оптической плотности или коэффициенту пропускания раствора. Действие фотометра основано на том, что многие химические соединения поглощают свет в определенной спектральной области. При этом в определенных пределах концентраций величина оптической плотности раствора (то есть интенсивность поглощения света) прямо зависит от концентрации вещества в растворе. Оптическая плотность раствора определяется по формуле:

D = E l c

D оптическая плотность

E коэффициент молярной экстинкции

l толщина кюветы

c концентрация раствора

E коэффициент молярной экстинкции (или молярный коэффициент поглощения)  это оптическая плотность раствора концентрацией 1 моль/л при длине светового пути (толщине кюветы) равной 1 см. Величина постоянная для каждого вещества при данной длине волны.

1 ручка изменения длины волны излучения

2 световое табло

3 панель управления

4 крышка кюветного отделения

5 ручка перемещения кювет

6 тумблер «Сеть»

7 выбор режима измерения оптической плотности

8 градуировка

9 результаты измерения оптической плотности холостой пробы (воды)

10 результаты измерения оптической плотности исследуемого раствора

11 кювета (внешний вид)

1. Включите прибор в сеть. При закрытой крышке кюветного отделения включите тумблер «Сеть» (6), расположенный на боковой поверхности прибора. Тумблер загорится красным светом. В нижней половине светового табло (2) сначала появится надпись «Прогрев прибора», затем надпись «Прогрев лампы». По истечении 10 мин фотометр выдаст звуковой сигнал и на табло появится надпись «Готов к работе. Введите режим».

2. Последовательным нажатием клавиши D на панели управления (3) выберите нужный режим измерения (А оптическая плотность), который высветится в нижней части светового табло (7).

3. Установите нужную длину волны круглой ручкой (1), находящейся слева на передней панели прибора (значение длины волны высвечивается в верхней строке светового табло). Установку длины волны необходимо выполнять подводкой со стороны коротких волн к более длинным. Если при установке значение длины волны превысило требуемое, необходимо вновь вернуться на 2030 нм к более коротким волнам и повторно аккуратно подвести к требуемому значению длины волны.

4. Промойте водой кюветы (11) и промокните их внутреннюю поверхность чистой фильтровальной бумагой. Снаружи также протрите их фильтровальной бумагой. Откройте крышку кюветного отделения (4). Налейте в кювету воду и установите ее строго вертикально в дальнее гнездо кюветодержателя. Исследуемый раствор налейте во вторую кювету и установите ее в ближнее гнездо кюветодержателя. При установке кювет нельзя касаться их рабочих поверхностей. Наличие загрязнений на рабочих поверхностях может привести к неверным результатам.

5. Ручку перемещения кювет (5) установите в крайнее левое положение.

6. Закройте крышку кюветного отделения.

7. Нажмите клавишу «#» на панели управления. В нижней части светового табло на верхней строке появится надпись «Градуировка» (8), а через 35 секунд надпись «Измерение». На нижней строке появится измеренное значение оптической плотности холостой пробы (воды), например «А = 0,000» (9). Оно должно составлять 0,000±0,002. Если значение А имеет большее отклонение от нуля, необходимо повторно провести градуировку (нажать «#»).

8. Ручку перемещения кювет установите вправо до упора. Через несколько секунд на нижней строке появится значение оптической плотности исследуемого раствора, например «А = 0,230» (10). Запишите полученное значение оптической плотности в рабочую тетрадь.

9. После завершения работы выключите прибор нажатием тумблера «Сеть» и отключите прибор из сети.

Термоблок предназначен для нагревания проб в пробирках и виалах в заданном температурном режиме.

ВАЖНО: прибор работает без заполнения ячеек водой. Заполнение водой опасно для жизни!

Термоблок ПЭ-4020. Общий вид.

1 тумблер «Сеть»

2 кнопка «Установка/работа»

3 кнопки установки температуры

4 ячейки для пробирок

5 световое табло

6 световой индикатор работы

1. Включите тумблер «Сеть» (1). Тумблер загорится красным светом.

2. Используя кнопки установки температуры (3) выставите на световом табло (5) требуемый температурный режим.

3. Нажмите кнопку «Установка/работа» (2). После этого начнется нагрев ячеек. Световой индикатор работы (6) станет мигать красно-зеленым цветом, а на световом табло высветится текущая температура в ячейках, которая будет постепенно увеличиваться, пока не достигнет заданного значения. После этого термоблок будет работать в режиме поддержания заданной температуры.

4. После достижения заданной температуры установите пробирки с исследуемыми растворами в ячейки термоблока (4) и оставьте их в течение необходимого срока инкубации.

5. После завершения работы выключите прибор нажатием тумблера «Сеть» и отключите прибор из сети.

Правила пользования автоматической пипеткой переменного объема

1. Объем дозирования отображается на цифровом дисплее на рукоятке пипетки (рис. 1).