Все реакции имеют свой регламент, обусловленный оптимальным соотношением вступающих в реакцию компонентов, поэтому чем мельче шаг дозирования (как пробы, так и реагента), тем с большей вероятностью можно выдержать точный регламент реакции на малых объемах. Более того, при одинаковой возможной загрузке прибора (например, от 300 мкл реагента на анализ) более экономичной является такая конструкция дозатора, при которой можно установить шаг в 1 мкл, а не в 5 или 10 мкл для реагента, и 0,5–0,7 мкл, а не 1–1,5 мкл для пробы, так как это оставляет пользователю возможность работы с дробными объемами и не вынуждает его увеличивать загрузку реагента, например до 400 мкл, только потому, что невозможно изменить дозирование пробы с 4 на 4,5 мкл.
Таким образом, для оптимального выбора автоматического анализатора необходимо оценивать не только его аналитические возможности и математическое обеспечение, но и конструкцию основных узлов, оказывающую немалое влияние как на риск возникновения системных и случайных ошибок, так и на экономичность расхода реагентов.
Для адекватного выбора анализатора существенное значение имеет не только его производительность и «интеллектуальность», но и соответствие его нуждам конкретной лаборатории и конкретного лечебного учреждения. Во-первых, необходимо определить предполагаемую загрузку прибора (поток пациентов). Во-вторых – учесть возможности штатного расписания и квалификацию персонала. В-третьих – определить, какие именно тесты и в каком количестве предполагается проводить. С этой целью мы предлагаем следующие таблицы выбора (см. табл. 2, 3).
Все современные гематологические автоанализаторы измеряют и концентрацию гемоглобина, для чего у них имеется встроенный гемоглобинометр. При этом измерение концентрации гемоглобина происходит параллельно с определением концентрации лейкоцитов.
Оптические гематологические анализаторы в своей работе используют эффекты светорассеяния и флуоресценции, часто такие устройства называют проточными цитометрами. Измерение светорассеяния на клетках крови в проточных цитометрах производится в определенные телесные углы: 5°, 10°, 90°. Таким же образом измеряется деполяризация светорассеяния от клеток в 90°. Сочетание упомянутых сигналов светорассеяния применяется для дифференцировки лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов, базо-филов, эозинофилов. Рассеяние в телесные углы 5° и 10° используют для измерения объема и концентрации гемоглобина эритроцитов. В измерительной камере устройства молекулы некоторых клеточных структур, пересекая луч монохромного лазера, поглощают свет определенной длины волны и переходят в возбужденное состояние. Через короткое время клетки возвращаются в исходное состояние, но при этом испускают кванты света с иными длинами волн. Это вторичное излучение, имеющее строго определенные для каждого вида клеток или их структур длины волн, проходит через оптическую систему прибора и регистрируется фотоэлектронным умножителем, который преобразует его в электрические сигналы, которые затем обрабатываются с помощью компьютера.
Физические свойства клеток (размер или цитоплазматическая гранулярность) могут быть измерены на любой отдельной неокрашенной клетке. Клетки также могут быть помечены специфическими красителями, окрашивающими ДНК, РНК или белок, или целым набором флюорохром-конъюгированных антител, направленных к мембранным и внутриклеточным компонентам клеток.
Метод проточной цитометрии позволяет существенно увеличить объем информации, снимаемой с анализируемой частицы по светорассеянию. Только с использованием этой методики можно измерить индикатрису светорассеяния индивидуальной частицы. Индикатриса светорассеяния – это зависимость интенсивности рассеянного света от угла рассеяния. Причем диапазон измеряемых углов в проточных цитометрах составляет 5-120°. Технология проточной цитометрии включает в себя не только измерения индикатрисы светорассеяния, но и методы решения обратной задачи светорассеяния, т. е. методы, позволяющие получать информацию о морфологии клетки из индикатрисы светорассеяния. Таким образом, измерение и обработка индикатрис светорассеяния от клеток позволяют не только дифференцировать клетки крови, но и характеризовать эти клетки: определять их размер, форму, структуру, состав и т. д.